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细胞冻存液氮罐的具体操作步骤和细胞复苏流程

发布时间:2020-08-11 11:11:11 浏览:213次

       细胞冻存液氮罐的具体操作步骤和细胞复苏流程

  大量细胞如何储存在液氮罐里,液氮罐里一般灌有低温液氮,细胞的储存需要低温环境,放入-196度的液氮里对细胞是长期保存的一个适合的环境。细胞冻存液氮罐是将细胞存入液氮罐的液相里储存,有专用的方形抽屉式提篮,2ml冻存管放入冻存盒然后再放入提篮后浸入液氮里,完全浸入。使细胞完全处于液氮-196度环境下,才能够长期保存细胞。

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  细胞冻存液氮罐的具体操作步骤:

  1、培养皿或培养瓶中细胞按常规方法消化,或分离获得原代细胞后,收集于离心管中。

  2、使用离心机离心,去除上清,收集细胞沉淀。

  3、根据细胞生长密度加入适量的LiveCyteTM细胞冻存液进行重悬,充分混匀。

  4、将细胞悬液分装至冻存管中,直接放置于-80°C冰箱保存。24小时后可移入液氮长期保存(可选)。

  细胞冻存液氮罐的细胞复苏流程:

  1、从-80°C冰箱或液氮罐中取出细胞。

  2、迅速放入37°C水浴,并不时摇动,在3分钟之内使其完全融化。

  3、在冻存管中加入少量完全培养基,再将细胞混合液移入含有该细胞完全培养基的离心管中,样品和培养基比例为1:10,然后轻轻吹打,混合均匀。

  4、离心后去除上清,收集细胞沉淀。

  5、轻轻弹松细胞沉淀,加入适量培养液后接种于培养瓶或培养皿中,轻轻晃动使细胞分布均匀,置于37℃孵箱中培养。